文章目录

1 材料与方法

1.1 材料

    1.1.1 菌株和细胞

    1.1.2 主要试剂

    1.1.3 主要仪器

1.2 方法

    1.2.1 引物设计与合成

    1.2.2 冻干细菌的复苏培养

    1.2.3 16S rDNA及血清型的验证

    1.2.4 副猪嗜血杆菌YK1603和CY1201菌株菌量与OD600值关系曲线的测定

    1.2.5 副猪嗜血杆菌YK1603、CY1201菌株体外不同生长时期的培养

    1.2.6 副猪嗜血杆菌YK1603、CY1201菌株感染PK-15细胞

    1.2.7 总RNA的提取及cDNA反转录

    1.2.8 实时荧光定量PCR

    1.2.9 数据统计分析

2 结 果

2.1 冻干细菌的复苏培养鉴定

2.2 16S rDNA及血清型鉴定

2.3 副猪嗜血杆菌YK1603、CY1201菌株菌量与OD600的关系

2.4 副猪嗜血杆菌YK1603、CY1201菌株体外不同生长时期sRNA64和sRNA145转录分析

2.5 副猪嗜血杆菌YK1603、CY1201菌株感染PK-15细胞后sRNA64和sRNA145转录分析

3 讨 论

文章摘要:为研究副猪嗜血杆菌（Haemophilus parasuis,HPS）相关sRNA（small RNA）的调控机制,以复苏培养后的2株HPS辽宁分离菌株为研究对象,通过实时荧光定量PCR对体外不同生长时期以及感染PK-15细胞后sRNA64和sRNA145的转录水平进行了分析。结果表明,体外生长过程中sRNA64、sRNA145分别在强、弱毒株中差异表达,2株HPS感染细胞后sRNA64均差异表达,而sRNA145仅在强毒株中差异表达。另外,sRNA64、sRNA145分别在强、弱毒株体外生长后期达到转录高峰,感染细胞后sRNA64在强、弱毒株感染早期达到转录高峰,而sRNA145仅在强毒株感染细胞后期达到转录高峰。说明sRNA64和sRNA145作为差异表达基因对调控HPS发挥着作用,研究结果为sRNA在不同毒力HPS致病机制中的进一步研究提供了基础数据。

文章关键词:

项目基金:《今日畜牧兽医》 网址: http://www.jrcmsy.cn/qikandaodu/2021/1114/936.html